諾博萊德 植物膜蛋白提取試劑盒

植物膜蛋白提取試劑盒 常備現(xiàn)貨

產(chǎn)品貨號(hào)：P5008

產(chǎn)品名稱：植物膜蛋白提取試劑盒

產(chǎn)品規(guī)格：50T/100T

產(chǎn)品簡(jiǎn)介：

中文名稱：植物膜蛋白提取試劑盒

規(guī)格：100T ; 50T

儲(chǔ)存條件：2-8℃，1 year

具體產(chǎn)品的參數(shù)以收到產(chǎn)品說(shuō)明書(shū)的參數(shù)為準(zhǔn)

NobleRyder P5008 植物膜蛋白提取試劑盒

產(chǎn)品簡(jiǎn)介：

膜蛋白承擔(dān)各種生物功能，在疾病的發(fā)生、發(fā)展過(guò)程中扮演重要角色。膜蛋白樣品的制備需要充分考慮到與下游的膠分析及質(zhì)譜分析等應(yīng)用配套，因此膜蛋白樣本制備成為一個(gè)難以逾越的挑戰(zhàn)。

植物膜蛋白提取試劑盒是一種高效高產(chǎn)的膜蛋白提取試劑盒。植物膜蛋白提取試劑盒可以從各種植物中提取總膜蛋白，可用于純化蛋白的粗品制備及膜蛋白制備。提取過(guò)程簡(jiǎn)單方便。該試劑盒含有蛋白酶抑制劑混合物和磷酸酶抑制劑混合物，阻止了蛋白酶對(duì)蛋白的降解，為提取高質(zhì)量的蛋白提供了保證。

本試劑盒提取的蛋白可用于Western Blotting、蛋白質(zhì)電泳、免疫沉淀、ELISA、轉(zhuǎn)錄活性分析、Gel shift 凝膠阻滯實(shí)驗(yàn)、酶活性測(cè)定等下游蛋白研究實(shí)驗(yàn)。本試劑盒提取的蛋白為具有天然蛋白構(gòu)象的活性蛋白。

本試劑盒中不含有 EDTA，與金屬螯和層析等下游應(yīng)用兼容。

本試劑盒提取的蛋白樣本含有高濃度的鹽成分，不可直接用于2D 電泳，需要除鹽后再用于2D 電泳。

適用樣本：植物

注：

1. 蛋白酶抑制劑未開(kāi)蓋使用前也可以2-8℃儲(chǔ)存。開(kāi)蓋使用后-20℃儲(chǔ)存。

2. 蛋白酶抑制劑在2-8℃低溫時(shí)是固體狀態(tài)，從冰箱取出后恢復(fù)至室溫或37℃短時(shí)間水浴，變成液體狀態(tài)后離心至管底部再開(kāi)蓋。

3. 試劑拆封后請(qǐng)盡快使用完！

自備試劑和儀器：

離心機(jī)、振蕩器、渦旋混勻器、移液器、冰箱、冰盒，PBS緩沖液、蛋白定量試劑盒，離心管、吸頭、一次性手套

產(chǎn)品特點(diǎn)：

1、使用方便。蛋白提取時(shí)間短。

2、含蛋白穩(wěn)定劑，提取的蛋白穩(wěn)定。

3、紫外檢測(cè)蛋白濃度時(shí)，背景干擾低。

4、蛋白酶抑制劑抑制了蛋白的降解，蛋白酶抑制劑配方優(yōu)化。蛋白酶抑制劑混合物包含6 種獨(dú)立的蛋白酶抑制劑 AEBSF、Aprotinin、Leupeptin、Pepstatin A、Bestatin、E-64，每一種抑制劑可特異性抑制某一種或幾種蛋白酶活性。該混合物優(yōu)化的組成使其可以抑制幾乎所有重要的蛋白酶活性，包括絲an酸蛋白酶、半胱an酸蛋白酶、天冬氨酸蛋白酶、丙氨酰-氨基肽酶等。

使用方法：

一、使用注意事項(xiàng)：

1. 旋帽離心管裝的試劑在開(kāi)蓋前請(qǐng)短暫離心，將蓋內(nèi)壁上的液體甩至管底，避免開(kāi)蓋時(shí)液體灑落。

2. 實(shí)驗(yàn)過(guò)程中的所有試劑須預(yù)冷；所有器具須放-20℃冰箱預(yù)冷。整個(gè)過(guò)程須保持樣品處于低溫。

3. 蛋白酶抑制劑在 2-8℃時(shí)是固體狀態(tài)，從冰箱取出后恢復(fù)至室溫或 37℃短時(shí)間水浴，變成液體狀態(tài)后離心至管底部再開(kāi)蓋。

4. 蛋白酶抑制劑儲(chǔ)存期間溶液如果出現(xiàn)沉淀，不影響使用，溶解后正常使用。

5. 可以根據(jù)自己實(shí)驗(yàn)需要加入其它蛋白酶抑制劑單品。

6. 提取液 A 在使用前須一直置于 2-8℃條件，否則下游膜蛋白提取時(shí)會(huì)導(dǎo)致不容易分層。

7. 膜蛋白電泳時(shí) loading buffer 應(yīng)該避免煮沸。

8. 膜蛋白電泳時(shí)可以提高 loading buffer 的 SDS 含量。

9. 離心機(jī)轉(zhuǎn)速有相對(duì)離心力（RCF，×g）和每分鐘轉(zhuǎn)速（RPM）兩種表示方式，有些離心機(jī)設(shè)置有 RPM 和×g 顯示切換，但部分離心機(jī)沒(méi)有自動(dòng)切換功能。需要用下面的公式進(jìn)行換算：g=r×1.118×10^-5×rpm² （r 為有效離心半徑，即從離心機(jī)軸心到離心收集管底部中心位置的長(zhǎng)度，單位為厘米) 例如: 轉(zhuǎn)速為 3000rpm，有效離心半徑為 10 cm，則相對(duì)離心力（RCF，×g）為=10×1.118×10^-5×3000²=1006.2（×g）。

二、植物膜蛋白提取

1. 提取液準(zhǔn)備：

每 500μl 冷的提取液 A 中加入 2 μl 蛋白酶抑制劑混合物，充分混勻后置冰上備用。

【注】：

1) 根據(jù)需要處理的樣品數(shù)量準(zhǔn)備蛋白提取液，蛋白酶抑制劑混合物不可以一次全部加入提取液。

2) 加過(guò)蛋白酶抑制劑的提取液一周內(nèi)未使用完，再次使用前需要再次加入蛋白酶抑制劑。

3) 以下步驟中使用的蛋白提取液為此步配制好的含蛋白酶抑制劑的提取液。

4) 提取液 A 在使用前須一直置于 2-8℃條件，否則下游膜蛋白提取時(shí)會(huì)導(dǎo)致不容易分層。

2. 取洗凈擦干后并去除葉梗和粗脈的 100-200 mg 植物組織樣本用手術(shù)jian刀盡可能剪碎。

3. 加入 500μl 冷的提取液 A，用勻漿機(jī)/勻漿器充分勻漿。

【注】：

1) 也可以用液氮研磨處理后加入提取液 A。

2) 沒(méi)有液氮研磨條件也可以直接加入冷的提取液 A 在冰上研磨處理。

3) 如果組織樣品很細(xì)小，可以剪碎后直接加入提取液 2-8℃振蕩，可以不用勻漿器。

4. 將勻漿移入另一個(gè)預(yù)冷的干凈離心管中在 2-8℃條件下振蕩 1-2 小時(shí)。

【注】：

1) 此步驟必須 2-8℃條件下進(jìn)行。

2) 使用振蕩器/搖床的較低轉(zhuǎn)速，提取液能輕微晃動(dòng)即可。

3) 如果沒(méi)有 2-8℃持續(xù)振蕩條件，也可直接置 2-8℃冰箱靜置 1-2 小時(shí)，中間每隔 10 分鐘渦旋振蕩混勻。

5. 將提取液在 2-8℃低溫下 12000×g 離心 5 分鐘，取上清。

6. 在上清中加入 5μl 提取液 B，充分混勻。

7. 在 37℃水浴 10 分鐘。

8. 在 37℃，1000×g 離心 3 分鐘。

【注】：

1) 此步驟必須 37℃條件下離心。

2) 如果離心機(jī)不可控溫，可以不離心，延長(zhǎng)上一步驟水浴時(shí)間，至溶液分層清晰即可?；蛘咴谑覝貤l件下離心，縮短離心時(shí)間至 1 分鐘。

9. 此時(shí)溶液分為兩層，小心移除上層，留下管底部下層大約 30-50μl 液體。

【注】：

1) 下層為粘稠狀液體。

2) 含葉綠體的植物樣本下層膜蛋白為黃綠色。通常不影響下游應(yīng)用。

10. 用 50-150μl 冷的膜蛋白溶解液 C 溶解下層溶液，即得膜蛋白樣品。

【注】：

1) 膜蛋白比較難溶解，不能很快溶解混勻，可以在加入溶解液后稍微吹打混勻，然后置于4℃冰箱靜置至溶解。中途用移液器輕輕吹打混勻一次。靜置后取出再次用移液器稍微吹打混勻即可。

2) 于 4℃靜置直至管底透明膠狀物wan全溶解。

11. 將上述蛋白提取物定量后分裝于-80℃冰箱保存?zhèn)溆没蛑苯佑糜谙掠螌?shí)驗(yàn)。

【注】：

1) 建議用 BCA 法進(jìn)行蛋白定量。

2) 蛋白樣品－80℃存放一年沒(méi)有問(wèn)題。注意不要被蛋白酶水解掉，不要被細(xì)菌污染。

注意事項(xiàng)：

1. 正式實(shí)驗(yàn)前請(qǐng)選取幾個(gè)樣本做預(yù)實(shí)驗(yàn)，以優(yōu)化實(shí)驗(yàn)條件，取得優(yōu)良實(shí)驗(yàn)效果。

2. 螺旋蓋微量試劑管裝的試劑在開(kāi)蓋前請(qǐng)短暫離心，將蓋和管內(nèi)壁上的液體離心至管底，避免開(kāi)蓋時(shí)試劑損失。

3. 禁止與其他品牌的試劑混用，否則會(huì)影響使用效果。

4. 樣品或試劑被細(xì)菌或真菌污染或試劑交叉污染可能會(huì)導(dǎo)致錯(cuò)誤的結(jié)果。

5. 最好使用一次性吸頭、管、瓶或玻璃器皿，可重復(fù)使用的玻璃器皿必須在使用前清洗并che底清除殘留清潔劑。

6. 實(shí)驗(yàn)后完成后所有樣品及接觸過(guò)的器皿應(yīng)按照規(guī)定程序處理。

植物膜蛋白提取試劑盒 常備現(xiàn)貨

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